Preparação para SDS-PAGE
- Agitar a amostra durante 10-20 segundos;
- Preparar dois eppendorfs com 20 μL de Tampão de amostra SDS;
- Adicionar 20 μL de amostra aos dois eppendorfs com 20 μL de Tampão de amostra SDS (não transferir restos celulares!);
- Aquecer os eppendorfs durante 5 minutos;
- Carregar 10 μL da mistura no SDS-PAGE;
- Deixar o gel correr entre 30 minutos a 1 hora, a 200 V;
Preparação para Microscopia de Fluorescência
- Preparar três eppendorfs com 1 mL de água em cada;
- Picar três colónias da placa marcada (+) e ressuspender cada colónia num dos eppendorfs;
- Colocar 10 μL de cada tubo numa lâmina para microscópio;
- Colocar uma lamela sobre o líquido;
- Observar as células no Microscópio de Fluorescência;
- Desenhar os primers que foram usados para a amplificação do gene GFP com a adição das sequências necessárias para o gap-repair.
Conceitos Básicos
SDS-PAGE é uma técnica usada em bioquímica, genética e biologia molecular para separar proteínas de acordo com a sua mobilidade electroforética.
Ligações Externas
Electrophoresis - Molecular Weight Determination by SDS-PAGE
